HPLC och masspektrometri: så verifierar vi renhet på varje batch
En analyscertifikat säger inte mycket utan kontext. Här förklarar vi vad RP-HPLC, ESI-MS och Karl Fischer-titrering faktiskt mäter — och varför kombinationen är guldstandarden.
Renhet är inte ett enskilt tal. När vi anger 99,4 % renhet på en peptid bygger siffran på tre oberoende metoder som tillsammans beskriver molekylens identitet, integritet och vatteninnehåll.
RP-HPLC — kvantifiering
Reverserad-fas vätskekromatografi separerar peptiden från syntesbiprodukter, trunkerade sekvenser och oxiderade former. UV-detektion vid 214 nm fångar peptidbindningen direkt och ger en area-procent som motsvarar relativ renhet.
ESI-MS — identitet
Elektrospray-jonisation kopplad till masspektrometri bekräftar att den dominerande toppen i HPLC faktiskt är rätt molekyl. Avvikelser på 1-2 Da indikerar oxidation eller deamidering, medan större avvikelser pekar på trunkering.
Karl Fischer — vatten
Lyofiliserade peptider innehåller alltid en liten mängd restvatten. Karl Fischer-titrering kvantifierar denna fraktion exakt, vilket är avgörande för korrekt doseringsberäkning. Vi kräver <5 % restvatten på alla batcher.
Endotoxinnivåer
LAL-test (Limulus Amebocyte Lysate) säkerställer att bakteriella endotoxiner ligger under detektionsgränsen. Detta är särskilt viktigt för forskning som involverar cellkulturer.